粗提液。菌体在受控条件下经过反复冻融,再配合超声裂解,让胞内成分释放出来。”
“……随后做差速离心,弃去大颗粒沉淀,保留上清。上清经过0.22微米无菌微滤,去除残余细胞和可培养活菌,再用不同截留分子量的超滤膜分级浓缩,记录每一组的截留分子量、浓缩倍数和回收率。”
“浓缩物还要做总蛋白定量?”
“当然!活性不能只用一支管子的体积描述,要按照总蛋白量、单位体积活性和单位蛋白活性分别标定。”
“每一批都先要做内毒素检测、无菌检验、支原体筛查和残余核酸检测。粗提液的活性标定仍然先做体外划痕实验,确认它能促进细胞层闭合,再进入动物剂量研究。”
孙汉章把三组动物曲线调出来。
“低、中、高三个剂量梯度,另设阴性对照。对照动物接受同样的清创、包扎和基础处理,只不给粗提液。”
“给药前要把动物品系、年龄、体质量、创面部位和损伤程度对齐。”
“每个嫦娥日同一时段做临床观察,体温、体质量、饮食、精神状态、创面面积、渗出液、结痂、肉芽组织、局部红肿和步态评分,都要记录。创面面积用标准化摄影结合图像分析,步态评分按承重、落地时间和跛行程度分级。”
“低剂量组反应轻,中剂量组愈合最顺,高剂量组局部炎症过强,体温升幅也过大。剂量存在治疗窗,不是越多越好。阴性对照组的创面按常规速度收缩,给药组的闭合率明显提高。”
“还要取组织做病理。不同时间点取皮肤、皮下组织、引流淋巴结和主要脏器,做组织病理学检查,观察炎症细胞浸润、肉芽组织形成、胶原沉积、血管新生和纤维化。”
“以及要做免疫原性检测,看看动物是否产生针对粗提液成分的抗体或细胞免疫反应。生物分布也得查,利用标记物追踪它在创面、血液、肝、肾、脾、肺里的分布和清除。只有局部有效、全身暴露可控、组织病理可接受,才有继续往下走的资格。”
江承把手指停在“SPF级动物、剂量梯度、阴性对照、组织病理、免疫原性、生物分布”一行。
“...送出去之前,我还做了活性标定。”孙汉章接着开口。
“把粗提液滴到刚铺好的细胞层上,看它能不能让缺口收拢。标定通过后,才配成待用剂量。”
“这一管我记了三样数,浓缩倍数、活性等级和剩余总蛋白量。以后就算这条线断了一辈子,别
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