了miRNA-21和miRNA-155这两个在消化道肿瘤中高表达的靶点。」
江河听着,微微点头。
思路没问题,靶点找得也很准。
孙长明教授的学术敏锐度确实是目前国内顶尖的一批。
刘师兄继续说道:「在具体操作上……」
汇报持续了大约二十分钟。
逻辑清晰,论证详实,有理论支撑,也有具体的病例库依托。
科研处的几位领导听完,都满意地点了点头。
这确实是一份规范且具有可行性的标书。
「讲得不错。」科研处主任看向杨煦这边,「杨主任,你们这边呢?你来汇报?」
杨煦转头看向江河。
江河站起身:「我来。」
顺着桌子,他把资料分发给科研处的领导、孙长明以及对面的几个核心成员。
发完资料,江河道:
「刚才师兄的汇报非常紮实。」
「但是,在具体的提取和扩增手段上,
我有一些不同的看法。」
「师兄刚才提到,通过扩大初始血清样本量来弥补RNA丰度的不足,这种做法在理论上可行,但在实际的临床检验中,会面临巨大的阻碍。」
「血清中不仅富含核糖核酸酶,更含有大量的蛋白抑制剂,盲目扩大样本量,意味着提取液中的抑制剂浓度也会成倍增加,传统的组织提取试剂盒,根本无法在这麽高浓度的蛋白环境下,有效分离出微小的RNA片段,最终的结果,不仅提取率极低,而且纯度达不到後续PCR扩增的标准。」
会议室里安静了下来。
刘师兄皱起眉头,似乎在思考江河提出的这个问题。
江河继续说:「我们团队的方案,是放弃传统试剂盒,从上游的提取步骤进行彻底的底层逻辑优化。」
「第一,改用针对液体的特定裂解液,并在裂解阶段人工干预,将pH值调低至偏酸性。」
「第二,在异丙醇沉淀阶段,加入适量的糖原作为共沉淀剂。」
「第三,放弃线性引物,改用茎环结构的特异性引物(Stem-loop RT primer)进行逆转录。这能有效避开前体RNA的干扰,只扩增成熟的miRNA,将特异性提高几个数量级。」
「基於这套改进的提取和扩增方案,我们只需要200微升的外周血清,就能得到极具临床参考价值的Ct值,这才
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